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追求合作共贏
Win win for you and me售前售中售后完整的服務體系
誠信經(jīng)營質(zhì)量保障價格合理服務完善一、操作前準備：保障實驗基礎
1. 環(huán)境與設備校驗
環(huán)境要求 ：
溫度：15-30℃（恒定±1℃）
濕度：≤80%
遠離震動源（如離心機、搖床）
開機校驗 ：
啟動后執(zhí)行自動光學校準 （≥30分鐘預熱）
使用標準校準板驗證孔間信號一致性（CV值＜5%）
2. 耗材與試劑選擇
專用耗材 ：
僅使用原廠認證96孔板 （如MicroAmp™ Optical Plate）
匹配光學級封膜 （防止蒸發(fā)與透光干擾）
試劑規(guī)范 ：
預混試劑提前解凍（冰上操作），避免反復凍融
反應體系推薦：20-50μL （低體積需校準加樣精度）
二、標準化操作流程
Step 1 實驗設計與軟件設置
創(chuàng)建新程序：
命名實驗（例：靶標分子_202405）
選擇檢測通道（FAM/VIC/ROX等，支持5通道同步）
設置反應程序：
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
| 預變性 | 95℃ | 10 min | 1 |
| 擴增 | 95℃→60℃ | 15 sec→1 min | 40 |
| 熔解曲線 | 95℃→60℃ | 15 sec→1 min | 1 |
Step 2 加樣與上機
分區(qū)操作防污染 ：
試劑配制區(qū)（潔凈臺） → 樣本處理區(qū)（生物安全柜） → 擴增分析區(qū)（獨立空間）
反應體系構建：
模板DNA：≤100 ng/孔
引物/探針：按預混試劑說明書濃度添加
推薦體系：
預混試劑 10 μL + 引物探針 2 μL + 模板 3 μL + ddH?O 5 μL
上機操作：
孔板輕震離心（避免氣泡）
按A1→H12順序 放置，確?？孜慌c軟件匹配
Step 3 運行監(jiān)控與數(shù)據(jù)分析
實時監(jiān)控：
軟件界面查看擴增曲線 與熒光閾值（ΔRn）
異?？孜粯擞洠ㄈ缧盘柼S、無擴增）
結果解讀：
Ct值判定 ：閾值線設定在指數(shù)擴增期（建議自動計算）
熔解曲線 ：單峰=特異性擴增，多峰=引物二聚體
三、關鍵注意事項與排障方案
| 問題現(xiàn)象 | 原因分析 | 解決方案 |
| 孔間信號差異＞10% | 孔板透光不均 | 更換原廠認證耗材 |
| 擴增曲線呈鋸齒狀 | 反應體系氣泡或污染 | 離心后重新上機；更換試劑 |
| ROX校正失敗 | 光學模塊污染 | 執(zhí)行深度校準程序并清潔樣品槽 |
| 溫度控制超差±0.5℃ | 散熱口堵塞 | 清理濾網(wǎng)，確保通風 |
四、日常維護與校準
每周維護 ：
用無絨布蘸70%乙醇清潔樣品槽
檢查散熱濾網(wǎng)（積塵降低制冷效率）
五、安全與合規(guī)聲明
本操作需在BSL-1級實驗室 環(huán)境下進行：
穿戴實驗服、手套及護目鏡
廢棄耗材按《實驗室生物安全手冊》分類處置
設備僅用于科研與質(zhì)檢用途
